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產(chǎn)品貨號: IN0005

產(chǎn)品規(guī)格: 100ml/500ml

產(chǎn)品品牌:Invigentech

產(chǎn)品概述：

1.包裝規(guī)格

規(guī)格：100ml 、500ml

2.儲存條件

4℃避光保存1年；如果長期不用，可-20℃避光保存；可在4℃或室溫運(yùn)輸。

1. 產(chǎn)品描述：

2. 本試劑以化學(xué)發(fā)光方法檢測蛋白質(zhì)或核酸類生物大分子。蛋白質(zhì)或核酸類生物大分子在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，分別用一抗和辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP)標(biāo)記的二抗順序結(jié)合膜上的目的蛋白；或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的目的核酸。洗膜后用新鮮配制的ECL工作液，在室溫下避光孵育膜2-3 min，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒，然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光時長可為數(shù)秒到數(shù)小時。顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上，也可不進(jìn)行X光膠片曝光顯影步驟， 直接對印跡膜進(jìn)行CCD掃描。

3. 操作說明

4. 1.使用合適的方法進(jìn)行Western Blot實驗，直至用PBST或TBS/TBST洗滌二抗。

5. 2.新鮮配制ECL工作液：ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液按1:1混合后即為ECL工作液。工作液混合后請盡快使用，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

6. 3.用平頭鑷取出印跡膜，搭在濾紙上瀝干洗膜液但勿使膜*干燥。用ECL工作液均勻滴加至印跡膜上，確保*均勻覆蓋，室溫孵育2-3 min。ECL工作液使用量大約為0.125 ml/cm2膜或根據(jù)個人實驗習(xí)慣使用。

7. 4.用平頭鑷夾住印跡膜，棄發(fā)光工作液，用吸水紙略吸去多余工作液。

8. 5.快速將印跡膜置于二層保鮮膜之間，盡量趕盡氣泡。

9. 6.將印跡膜蛋白面朝上，放于X光膠片暗盒內(nèi)，用透明膠帶粘貼邊緣固定。

10. 7.在暗室內(nèi)放入X光片，根據(jù)顯色情況曝光適當(dāng)時間，顯影定影。

11. 8.根據(jù)信號的強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光及顯影時間，也可選擇不同時間多次曝光，以達(dá)更佳效果。

12. 注意事項

13. 1.ECL工作液配制過程中吸取ECL Substrate A 液和Peroxide Solution B液時務(wù)必更換吸頭，工作液新鮮配制后應(yīng)立即使用，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

14. 2.Peroxide Solution B液含有氧化劑，易被還原而失效。各溶液使用后，請蓋緊瓶蓋，以防失效。

15. 3.ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)最終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。

16. 4.盡量避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成背景增加。

17. 5.應(yīng)使用高質(zhì)量保鮮膜。質(zhì)量較差的保鮮膜可能會淬滅熒光或由于含有雜質(zhì)而污染印跡膜造成曝光背景值偏高。

18. 6.根據(jù)目的蛋白豐度不同，曝光時間可能是數(shù)秒至數(shù)小時。曝光時間不足會導(dǎo)致目的條帶不明確，曝光時間過長會使背景加深。

19. 7.（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。

20. 8.由于發(fā)光液極其靈敏，推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000，二抗1:2000-1:5000。抗體濃度過高可能造成高背景或沒有條帶。

21. 9.ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液均對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

22. 只能用于科學(xué)研究使用，禁止用于人、動物或者其它用途。