型號(hào):AV1501-A 更新時(shí)間:2023-10-23
人尿源間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 該試劑盒為經(jīng)過優(yōu)化的低血清(2%V/V)尿源間充質(zhì)干細(xì)胞(Urine-derived mesenchymal stemcell, USC)分離培養(yǎng)基。
品牌 | 上海創(chuàng)凌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
產(chǎn)品貨號(hào):AV1501—A
產(chǎn)品名稱:人尿源間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒
Human urine- -derived mesenchymal stem cell isolation kit
人尿源間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒產(chǎn)品描述:
該試劑盒為經(jīng)過優(yōu)化的低血清(2%V/V)尿源間充質(zhì)干細(xì)胞(Urine-derived mesenchymal stem
cell, USC)分離培養(yǎng)基。用于選擇性篩選泌尿系統(tǒng)來源的尿源間充質(zhì)干細(xì)胞。低血清和選擇性生長(zhǎng)因子、激素的聯(lián)合應(yīng)用確保尿源干細(xì)胞在體外環(huán)境下的原代篩選和旺盛的增殖活力,配合人尿源間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒可在短時(shí)間內(nèi)收獲大量細(xì)胞。
注意事項(xiàng):
·配好后避光2-8℃保存, 4周內(nèi)使用完畢
·所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用, 超過保質(zhì)期, 必須放棄使用
·為確保產(chǎn)品質(zhì)量,請(qǐng)避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品
尿源間充質(zhì)干細(xì)胞(USC)原代提取
1、準(zhǔn)備工作:
明膠包被:取適量0.1%明膠包被6孔板, 蓋過孔底即可,鋪平,放置37屯培養(yǎng)箱30分鐘以上,備用
注意事項(xiàng):
.包被明膠的培養(yǎng)皿在無茼和明膠不蒸干的條件下,可以在4℃保存兩周。
2、尿液收集:
T75培養(yǎng)瓶或無茼取尿瓶表面噴75%酒精消毒,受試者戴無菌手套, 進(jìn)行200ML或以上尿液收集
注意事項(xiàng):
●收集尿液之前需對(duì)尿道外口進(jìn)行消毒:男性尿道外口噴75%酒精;女性用75%酒精濕巾擦拭尿道外口3次
●避免晨尿,盡量留取清潔中段尿
●注意無菌操作,勿觸摸瓶口,留取完畢后盡快封閉培養(yǎng)瓶拿至無菌操作間進(jìn)行后續(xù)操作,室外放置
時(shí)間不宜過久
3、原代提取:
1) 75%酒精消毒尿瓶外表面,轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái),用移液槍將尿液分裝至50ml無菌離心管(4管左右)
2) 1500rpm,10min離心
3)取出明膠包被的六孔板,棄除多余明膠,放置工作臺(tái)風(fēng)干備用
4)離心完畢,棄尿上清,每管保留細(xì)胞沉淀不超過1ml
5)其中一管加入20ml PBS, 吹打混勻細(xì)胞沉淀
6)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至另一支離心管,吹打混勻,如此反復(fù),直至將所有細(xì)胞沉渣懸液匯集于后一支離心管
7) 1500rpm,10min 離心
8)棄上清,12ml USC分離培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉渣,2ml/孔接種至六孔板, 記為P0-day1 (原代第1天)
9)此時(shí)光鏡下可見大量漂浮尿源多邊形角質(zhì)細(xì)胞,培養(yǎng)皿放置379C培養(yǎng)箱
10)第2天,觀察是否有污染情況(細(xì)菌污染:培養(yǎng)基渾濁變黃,鏡下可見細(xì)沙狀細(xì)菌)
11)第3或4天,每孔加1ml USC分離培養(yǎng)基
12)第5或6天半量換液(棄1ml,加1ml USC分離培養(yǎng)基)
13)第8天左右,光鏡下可觀察米粒樣USC原代克隆形成
14)待克隆形成的形態(tài)稍大(第10天左右),克隆形成孔進(jìn)行全換液,即棄漂浮細(xì)胞,PBS清洗,添加
2mlUSC分離*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)
15)待大片密集克隆細(xì)胞形成(第12天左右,融合度達(dá)90%以上),0.25% EDTA- -胰酶消化(尤其細(xì)胞克隆密集的地方) , USC分離*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞量傳至6孔板或10cm培養(yǎng)皿,記為P1代。
16)細(xì)胞隔天換液,待P1代細(xì)胞融合率達(dá)90%左右,0.25% EDTA-胰酶消化,換用USC擴(kuò)增*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按1: 4比例傳代,進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
●一般正常人尿液中的細(xì)胞沉淀有時(shí)較少,離心后管底不易觀察到,操作盡量輕柔,避免誤吸
●一般正常人200ml尿量可出3~5克隆,較少情況下無克隆產(chǎn)生,與供者身體素質(zhì)和時(shí)間有關(guān)
●USC細(xì)胞生長(zhǎng)較快,待克隆集簇融合成大片,或內(nèi)部生長(zhǎng)空間較小時(shí)即可進(jìn)行消化傳代
●原代細(xì)胞培養(yǎng)一般不超過14天,若14天尚無克隆產(chǎn)生,可棄
●為獲得活力旺盛的原代尿源干細(xì)胞,原代(P0)與P1代均需用USC分離*培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性篩選,P2代開始換用USC分離*培養(yǎng)基
本尿源間充質(zhì)干細(xì)胞分離*培養(yǎng)基經(jīng)過原代尿液分離培養(yǎng)性能測(cè)試,詳見附圖(1, 2)
質(zhì)量控制
√無菌檢測(cè)(細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè))
√ pH測(cè)試
√滲透壓檢測(cè)
√內(nèi)毒素檢測(cè)
圖一
附圖1人尿源間充質(zhì)干細(xì)胞原代提取流程圖
附圖2人尿源間充質(zhì)干細(xì)胞原代提取、克隆形成圖片(光鏡: 100X )
day5~9可見米粒樣集簇細(xì)胞克隆形成,day10~14細(xì) 胞克隆融合成大片可進(jìn)行消化傳P1代
15021202164
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