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RAW264.7細胞轉染效率低怎樣提高轉染效率一直是困擾實驗者的一道難題，特別對于比較大的質(zhì)粒DNA的轉染更是困難；我們實驗室用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑貨號AD600150轉染raw 264.7細胞整理了一套優(yōu)化方案希望對大家轉染raw 264.7細胞提高轉染效率有一定的幫助。

下圖是用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑貨號AD600150在6孔板轉染8000bp左右的pEGFP-C1r到RAW264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。

提高轉染raw 264.7細胞條件如下

一、質(zhì)粒DNA準備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉染。

2、復合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life公司Advanced DNA RNA貨號AD600150轉染試劑按照1:1（12ug:12ul）關系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。

3、將復合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）。

4、轉染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉染48小時后熒光檢測轉染效率

三、注意事項：

1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；

2細胞培養(yǎng)Zeta Life z7181-500胎牛血清，Gibco的DMEM;

四、美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑信息：